磷酸果糖激酶活性检测试剂盒（货号：AKSU）
磷酸果糖激酶（PFK）可催化果糖-6-磷酸转化为果糖二磷酸，即糖酵解途径的第二次磷酸化反应，作为糖酵解过程中的主要限速酶及主要调节点，糖酵解的速度主要取决于磷酸果糖激酶的活性，其活性测定对于糖酵解通量分析、临床医学和信号传导机制等研究具有重要意义。
磷酸果糖激酶能够催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶依次催化NADH氧化生成NAD+，NADH在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的下降速率即可表征磷酸果糖激酶的活性。
磷酸果糖激酶活性检测原理
测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿（光径=10mm）/96孔UV板、研钵/匀浆器、可调式移液器/多道移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞到离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。
吸光值测定：①迅速混匀并开始计时，测定20s（总时间）时nm处吸光值，记为A1；②37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确反应s，测定s（总时间）时nm处吸光值，记为A2；③计算A测定=A1-A2。
注意事项
①试剂三配置后稳定期较短，为便于试验安排，附赠一组试剂三作为备用，每组均可满足至少50个样本的测定；
②测定过程中试剂一、试剂二和粗酶液须冰上放置以免失活；
③准确在相应时间点完成吸光值的测定，以保证实验结果的准确性；若使用96孔UV板应使用多道移液器且分批进行检测，以确保组间反应时间一致；
④若A≥0.5（微量石英比色皿）或0.3（96孔UV板）建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定，或适当缩短反应时间使A0.5或0.3，以提高检测的灵敏度，计算时相应修改；
⑤为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.
