糖原合成酶（GCS）检测试剂盒（微量法）
产品货号：BA
产品规格：管/96样
产品简介：
糖原合成酶（Glycogensynthase,GCS）将UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端，以α-1,4糖苷键连接。GCS是动物机体糖原合成过程的限速酶，同时也是胰岛素作用的主要靶酶，在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。
GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH生成NAD+，在nm下测定NADH的下降速率，即可反映GCS活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
试验中所需的仪器和试剂:
紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
产品组成：
溶液的配制：
1.工作液的配制：临用前将试剂三、试剂四和试剂五转移到试剂一中混合溶解后待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存1周。
2.试剂八的配制：临用前在试剂八中加入5mL试剂二充分溶解，再将试剂六和试剂七转移到试剂八中混合溶解后待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存1周。
操作步骤(仅供参考)：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，g4℃离心10min，取上清液待测。
2.细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（个）:提取液体积（mL）为~0：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接检测。
二、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.临用前将工作液与试剂八置于37℃水浴锅中预热5min（工作液用多少预热多少）。
3.操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：
三、GCS酶活计算
A、按微量石英比色皿计算：
1.按蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GCS酶活（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×Cpr）÷T=.4×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算
酶活定义：每克样本每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GCS酶活（U/g质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样×W÷V样总）÷T=.4×ΔA÷W
3.按细菌或细胞数量计算
酶活定义：每个细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GCS酶活（U/cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T
=.4×ΔA÷细胞数量（万个）
4.按液体体积计算
酶活定义：每毫升液体每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GCS酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷V样÷T=.4×ΔA
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；：单位换算系数，1mol=nmol；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；V样：反应体系中样本体积，0.01mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间：1min。
B、按96孔UV板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔UV板光径）进行计算即可。
注意事项：
1.样本提取上清液置于冰上待测，提取样本建议当天测完。
2.若ΔA大于0.2，建议将样本用提取液稀释适当倍数后测定，以提高检测灵敏度，并在计算公式中乘以相应的稀释倍数。