BCN-PEG-FA,关于叶酸的检测方法有哪些?
今天小编整理并分享关于叶酸的检测方法,一起看看吧:
叶酸:维生素B9叶酸是什么?
叶酸是一种水溶性维生素,别名维生素B9,分子式是C19H19N7O6。因绿叶中含量丰富而得名,又名蝶酰谷氨酸。在自然界中有几种存在形式,其母体化合物是由蝶啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸3种成分结合而成。
叶酸以8种辅酶形式存在于生物体内,为一碳单位的载体参与嘌呤、喀啶等重要物质的合成。用于评价人体叶酸营养状况ZUI常用的检测指标是红细胞叶酸及血清或血浆叶酸。目前,叶酸的检测方法已有多种,其中微生物法、同位素放射免疫法的使用ZUI广。
微生物法:
传统的微生物学检测方法是试管法,操作繁杂,具有灵敏度高,结果准确的特点。
微生物法是检测生物体内叶酸的经典方法,通常所用的微生物有干酪样乳酸杆菌(L.casei)、粪链球菌和啤酒小球菌属。此3种微生物对不同形式叶酸的敏感度不同。
粪链球菌:只对非甲基化叶酸敏感,如PteGlu、二氢叶酸(DHF)和四氢叶酸(THF),可用于鉴别分析各种形式叶酸在不同检测物的分布。
L.casei对单谷氨酸叶酸、含2或3个谷氨酸叶酸(PteGlu2、PteGlu3)及其还原型衍生物均敏感,是3种微生物中反应谱带ZUI宽的一种,也是ZUI为常用的菌种。它对含7个谷氨酸叶酸(PteGlu7)的敏感度很小,约为对PteGlu敏感度的1%,故有人认为L.casei对超过3个谷氨酸基团的多谷氨酸叶酸无响应。但是L.casei对叶酸的反应谱带较宽,如检测物中含有多谷氨酸叶酸需将样品在检测前加入多谷氨酸叶酸水解酶进行水解,使各种形式叶酸均转变成单谷氨酸叶酸,否则检测结果不能代表其叶酸总含量。
应用:微生物法除可用于检测血清和全血叶酸外,还可用于检测纸血片叶酸。
同位素放射免疫法:
同位素放射免疫法检测血清叶酸,方法具有快速、简便的特点,同时由于叶酸放射免疫试剂盒的出现,很快得到普及。
同位素放射免疫法对多谷氨酸叶酸反应的相对灵敏度有较大的差别,随着叶酸浓度增加,反应的相对灵敏度增加,但多谷氨酸叶酸的反应曲线不可能与单谷氨酸叶酸的反应曲线重合;另一方面,多谷氨酸叶酸与结合蛋白的亲和性与单谷氨酸叶酸相比较高,不同的单谷氨酸叶酸衍生物反应灵敏度不同,放射免疫法也不适用于检测单谷氨酸叶酸衍生混合物。尽管放射免疫法可用于检测和评价叶酸的营养状况,但从定量检测的角度来讲,难以得到准确的叶酸含量。
检测叶酸的放射免疫试剂盒已有数种,其原理基本相同,区别在于:
竞争结合蛋白不同,或为猪血清结合蛋白,或为牛奶结合蛋白,或为β-乳球蛋白。
配制标准系列的溶液不同,主要有两种,即缓冲液和血清。
放射免疫法检测叶酸结果与试剂盒选择哪一种形式叶酸作标准品有关。
其他方法:气相色谱-质谱检测方法;色谱分析法;离子捕获法。
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